HRP标记物的化学发光测定
作者:zhn
发布时间:2022-09-02
19:07:20
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产品名称:HRP标记物的化学发光测定
产品描述:
辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP) 比活性高,稳定,分子量小,纯酶容易制备,所以常用。HRP分布于植物界,辣根中含量高,它是由无色的酶蛋白和棕色的铁卟啉结合而成的糖蛋白,糖含量18%。HRP由多个同工酶组成,分子量为40,000,等电点为pH3~9,酶催化的适pH因供氢体不同而稍有差异,但多在pH5左右。酶溶于水和58%以下饱和度硫酸铵溶液。HRP的辅基和酶蛋白吸收光谱分别为403nm和275nm,一般以OD403nm /OD275nm的比值RZ(德文Reinheit Zahl)表示酶的纯度。度的酶RZ值应在3.0左右(可达3.4)。RZ值越小,非酶蛋白越多。HRP的测定对学和化学的研究以及临床的诊断具有很重要的意义.实验仪器和试剂 LKB-1250发光光度计;ModelSA 720酸度计;微量取样器(50、100、200、500 uL);酶联吸附板.Luminol溶液(5.0×10~3moL·dm~3):用0.1 moEdm-8NaHCOg-NaOH溶液容解配制;KI溶液: 2.0×10~3 moL-dm-3,HgO溶液:2.0×10-* moLdm3;HR溶液(1.0:10g-mL-1)、称取100 mg HRP(RZ=2.5—3),溶解后,用蒸馏水稀释至100 mL,4℃冰箱保存.使用时用蒸馏水逐级稀释;HRP的乙型肝炎抗原和抗体等的标记物:HBsAg-HRP、HBsAb-HRP、HBoAb-HRP、PHSAR-HRP。操作步骤 于26 mL容量瓶中先加入约10mL水后,加入1.0mL EDTA溶液(1.0 g·mL-1),2.5 nL2,0×10~3 moLdm-3KI溶液,2.5 mL 2.0×10~moL·dm-3Hg0浴液,用水稀释至标线,摇匀备用.用微量取样器吸取上述溶液200 pL于酶联吸附板中,加入100 pL HRP(或其标记物),室温暗处放置20 min后,取此溶液100 puL放入LKB-1250发光光度计反应室,从仪器加液处加入500 uL5.0×10-3 moL·dm-3 Luminol,记录反应所产生的光信号强度,同时作空白试验后,绘制发光强度与HRP浓度间的关系曲线.结果与讨论偶合反应的时间性质 偶合反应的速度受酶促反应速度和化学发光反应速度两者影响,在碱性介质中,低浓度的碘氧化Luminol的化学发光反应属于的双电子氧化的一级反应2,其反应机理为 偶合反应的条件酶促反应的pH值﹐研究了HR催化Hg0z氧化KI生成I的反应中p互值的影响,发现在pH3.5—3.7范围内有较大的催化活性,而I2氧化Luminol的反应则以pH10为佳.无论是测定游离HRP还是其标记物,利用偶合反应化学发光分析法测定的灵敏度均高于直接催化法,因而能很好地用于化学发光酶分析中。以下为部分产品列表HRP-Ferrocene 二茂铁HRP-DOTA 四氮杂环十二烷四乙酸HRP-NOTAHRP-Dansyl 丹磺酰氯HRP-NBDHRP-Cyanur氰尿酸HRP-TRITC 四甲基罗丹明HRP-6-FAM 6-羧甲基荧光素HRP-FITC 异硫氰基荧光素HRP-CY3 菁染料CY3HRP-CY5HRP-CY5.5HRP-CY7HRP-CY7.5HRP-Rhodamine B 罗丹明BHRP-ICG 吲哚菁绿HRP-Comarin HRP-NIR-II dyes 近红外二区染料HRP-NIR-dyes 近红外染料HRP-Bodipy(BDP) 氟化硼二吡咯HRP-IR825HRP-HMME血卟啉单甲醚HRP-Ce6 二氢卟吩HRP-PLGAHRP-PCL 聚已内酯HRP-PLA 聚乳酸HRP-PAA 聚丙烯酸HRP-PS 聚丙乙烯zl 02.01 上一篇: PNIPAM体系水凝胶的温度响应性 下一篇: 生物分离介质分离纯化中可内素联系我们:
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