KLH蛋白和多肽通过SMCC偶连实验记录-BS3/SPDP/DSS

产品名称：KLH蛋白和多肽通过SMCC偶连实验记录-BS3/SPDP/DSS

产品描述：

KLH蛋白和多肽通过SMCC偶连实验记录-BS3/SPDP/DSSSMCC是一类含有N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活性酯和马来酰亚胺的双功能偶联剂.可以将分别含有巯基和氨基的化合物键接在一起。该交联试剂可渗透到细胞膜的脂质双层中，NHS活性酯与伯胺在PH7-9的环境形成酰胺键。马来酰胺与巯基在PH6.5-7.5的环境下形成稳定的硫醚键。在水溶液中，NHS活性酯的水解是（与氨基的反应）个竞争反应。马来酰胺比NHS稳定，但是在PH大于7.5时，马来酰胺会慢慢水解，失去与巯基反应的特异性。因而，在使用SMCC时通常是在PH7.2-7.5的环境下进行，并且先让NHS发生反应。SMCC结构里的环己烷环可以降低马来酰胺的水解速率。这使得蛋白质在用SMCC修饰之后可以冻干存放一段时间。很多蛋白质都选用该试剂来进行马来酰亚胺修饰。?KLH (Keyhole LimpetHemocyanin)，即血蓝蛋白，是在某些软体动物、节肢动物(蜘蛛和甲壳虫)的血淋巴中发现的一种游离的蓝色呼吸色素。血蓝蛋白含两个直接连接多肽链的铜离子，与含铁的血红蛋白类似，它易于氧结合，也易与氧解离，是已知的惟一可与氧可逆结合的铜蛋白，氧化时呈青绿色，还原时呈白色。其分子量45０ ０00～１30 000。由于KLH比BSA有更高的免疫原性，因而是常被选用的载体蛋白。?用SMCC来制备抗体-酶或者半抗原作载体的蛋白质，经常采用两步合成法。首先，含有氨基的蛋白质与几倍的偶联剂反应，反应结束后通过脱盐柱或者透析的方法除掉没有反应完的SMCC。然后，再与含有巯基的蛋白质反应。在实际操作中要注意的是，SMCC怕潮湿，存放时要和干燥剂一起存放。并且使用中从冰箱拿出来时要先在室外放置一段时间平衡温度，以免立刻开启，空气中水分遇冷凝结，破坏SMCC?结构。1、??将?20 mgSMCC（这是联接40条多肽的量）溶于2 ml DMF。2、??将0.8 mlKLH加入到25 ml圆底烧瓶中，补加1×PBS(pH 7.2)使蛋白终浓度为15 mg/ml。3、??将溶解好的SMCC溶液缓慢滴加到120mg KLH?蛋白体系中，室温搅拌反应1h。4、??用1 L1×PBS (PH 7.4)?溶液于4℃下透析?6?小时，除去游离的SMCC。5、??将透析后的KLH蛋白倒入50ml离心管中，通过离心管的刻度确定其体积，根据反应前加入的KLH蛋白的量来计算透析后蛋白的浓度，然后根据其浓度将2.5 mg KLH-SMCC溶液转移到5 ml离心管中。例如：反应前加入KLH蛋白的量为120 mg，透析后的KLH蛋白体积为20ml，那么透析后的KLH蛋白浓?????????????????????????????????????????????????????μlKLH-SMCC溶液转移到5 ml离心管中。6、??将?3.0 mg多肽用?0.6 ml 1×PBS (pH 7.2)?溶液溶解。注意：这里多称量出0.5 mg多肽是用来做ELISA检测的，取出100μl即可。检测多肽随交联好的抗原一起寄出，浓度为5 mg/ml。7、??用Ellman试剂检测多肽中的巯基：在96孔板中加入100μl Ellman试剂储备液，再加入10μl多肽溶液，用Nano分光光度计在λ=412nm下测其紫外吸收值，如果OD值>0.15做??????下一步；OD值<0.15并>0.05补加多肽，直至达到要求；OD值<0.05返回多肽合成步骤重新质控。Ellman试剂是用来检测游离巯基的，如果检测液显黄色说明多肽的Cys的巯基大部分以游离态存在；如果检测液不显黄色则说明多肽Cys中的巯基已经被氧化形成二聚体或多聚体。8、??将多肽液滴加到KLH-SMCC管中，室温下用垂直混匀器混匀反应4小时。用Ellman试剂检测多肽中的巯基：在96孔板中加入100 μl Ellman试剂储备液，再加入10 μl?教练后的多肽溶液，用Nano分光光度计在λ=412 nm下测定紫外吸收值。OD值<0.03说明多肽和KLH蛋白交联率已达到80%以上；OD值>0.03则再补加SMCC活化好的KLH蛋白继续交联。如果Ellman试剂显黄色说明多肽与KLH蛋白偶联不*；如果Ellman试剂不显黄色则说明多肽已经全部与KLH蛋白偶联?西安齐岳生物科技有限公司是国内的蛋白交联剂生产和销售商，我公司实验室生产高纯度的蛋白交联剂包含有SPDP，SMCC，PDPH，MBS，SBA，SMPB，BS3，DSS ，BS2G，DSG等等，产品纯度大于95% 价格比进口便宜50%以上 且大量屯有现货：?产品列表：Sulfo-NHS，N-羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐，CAS#: 106627-54-7Biotin-ONP，(+)-生物素-4-硝基苯酯，CAS#: 33755-53-2Biotin-PFP，五氟苯酚生物素酯/生物素五氟苯酯，CAS#:120550-35-86-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯，CAS#:55750-63-56-Maleimidohexanoic acid，CAS#：55750-53-3N-Maleoyl-β-alanine（MPA），CAS#：7423-55-44-Maleimidobutyric acid（MBA），CAS#：57078-98-511-马来酰亚胺十一烷酸?N-琥珀酰亚胺酯，CAS#：87981-04-22-马来酰亚胺基乙酸，CAS#：25021-08-311-Maleimidoundecanoic acid（KMUA）CAS#：57079-01-3Sulfo-EMCS,?ε-马来酰亚胺己酸磺基琥珀酰亚胺酯? CAS#：215312-86-0AMAS, CAS#：55750-61-31,2-Bis(maleimido)ethane, CAS#：5132-30-9Boc-6-Ahx-OSu, CAS#：51513-80-5N-Boc-2,2-(ethylenedioxy)diethylamine ,CAS#：153086-78-3N,N,N,N-Tetramethyl-p-phenylenediamine,CAS#：100-22-1N-Succinimidyl 6-Biotinamidohexanoate, CAS#：72040-63-2N-(+)-Biotinyl-6-aminohexanoic acid? CAS#：72040-64-3CAS#：127062-22-0DTSSPBS3? CAS#: 82436-77-9BS2GBSG?????? ? ??? CAS#: 79642-50-5DSP??????? CAS#: 57757-57-0DSS??????? CAS#: 68528-80-3DTSSP??? CAS#: 81069-02-5EGS?????? CAS#: 70539-42-3Sulfo-EGS????DSSeb??? CAS# 23024-29-5BMPS???? CAS#: 55750-62-4EMCS???? CAS#: 55750-63-5GMBS??? CAS#: 80307-12-6LC-SPDP??????MBS?????? CAS#: 58626-38-3PDPH???????????SBA?????? CAS#: 42014-51-7SIA??????? CAS#: 39028-27-8SMCC???? CAS#: 64987-85-5SMPB???? CAS#: 79886-55-8SMPH????SPDP????? CAS#: 68181-17-9Sulfo-LC-SPDP????Sulfo-MBSSulfo-SANPAH??????????? CAS #: 102568-43-4Sulfo-SMCC???????????????? CAS#: 92921-24-9Biotin Hydrazide?????????? CAS #: 66640-86-6NHS-Biotin????????????????? CAS#: 35013-72-0NHS-SS-Biotin???????????? CAS #: 142439-92-7Sulfo-NHS-BiotinHPG??????????????????????????? CAS#: 24645-80-5SATA?????????????????????????? CAS#: 76931-93-6Sulfo-NHS Acetate??????? CAS #: 152305-87-8Biotin-maleimide?????????Biotin ethylenediamine hydrobromide? CAS# 216299-38-6Biotinamidohexanoic acid hydrazide???? CAS#: 109276-34-8CAS#: 89889-52-1TSATBMPH?????????? CAS#:359436-61-6EMCH?????????? CAS#:151038-94-7KMUH?????????? CAS#:1593661-78-9BMOE?????????? CAS:5132-30-9BMB????????????? CAS#:28537-70-4BMH (bismaleimidohexane)???????? CAS#:4856-87-5TMEADTME?????????? CAS#:71865-37-7SATP???????????? CAS#:84271-78-3EMCA?????????? CAS:55750-53-3AEDP???????????以上资料源于西安齐岳生物科技有限公司如有其他信息或产品信息咨询请致电我们西安齐岳生物科技有限公司? 相关推荐： 载药聚合物胶束制备方法及两亲嵌段共聚 相关推荐： ICG载体材料用于肿瘤的光热治疗PTT和光

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